2009年考博生物化學(xué)與分子生物學(xué)核心十:氨基酸順序分析
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2010-04-23 00:00
氨基酸順序分析
蛋白質(zhì)多肽鏈的氨基酸順序分析,即蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定,主要有以下幾個(gè)步驟:??
1.?分離純化蛋白質(zhì),得到一定量的蛋白質(zhì)純品;??
2.?取一定量的樣品進(jìn)行完全水解,再測(cè)定蛋白質(zhì)的氨基酸組成;??
3.?分析蛋白質(zhì)的N-端和C-端氨基酸;??
4.?采用特異性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化學(xué)試劑(如溴化氰)將蛋白質(zhì)處理為若干條肽段;??
5.?分離純化單一肽段;??
6.?測(cè)定各條肽段的氨基酸順序。一般采用Edman降解法,用異硫氰酸苯酯進(jìn)行反應(yīng),將氨基酸降解后,逐一進(jìn)行測(cè)定;??
7.?至少用兩種不同的方法處理蛋白質(zhì),分別得到其肽段的氨基酸順序;??
8.?將兩套不同肽段的氨基酸順序進(jìn)行比較,以獲得完整的蛋白質(zhì)分子的氨基酸順序。